慢病毒純化、濃縮的兩種方法及步驟
慢病毒 純化和濃縮實驗分享
慢病毒 純化和濃縮實驗的主要試劑：
1. 70%乙醇
2. 20%的蔗糖溶液
3. PBS緩沖液
慢病毒純化和濃縮實驗的主要設(shè)備：
1. Ultra-clear SW28離心管
2. 超凈工作臺
3. 紫外燈
4. 10ml移液管
5. Beckman SW28 超速離心轉(zhuǎn)頭
6. 高速離心機(jī)
7. 50ml錐底離心管
8. 低溫冰箱 (-80度超低溫冰箱)
慢病毒的濃縮和純化方法一：PEG-8000 濃縮法
PEG (聚乙二醇)是高分子聚合物，具有高親水性，在溶液中會吸收大量水分，減少病毒之間的距離，使病毒與病毒能夠很容易的聚合在一起，病毒的相對濃度提高，達(dá)到沉淀濃縮的目的。
5X PEG8000+NaCl 配制稱取 NaCl 8.766 g; PEG8000 50g 溶解在 200ml Milli-Q純水中; 121 攝氏度 30min 濕熱滅菌 30min ;保存在 4 ℃ 。
1. 使用 0.45 μm濾頭過濾慢病毒上清液;
3. 每 20 ～ 30min 混合一次，共進(jìn)行 3-5 次;
4. 4 度放置過夜;
5. 4 度， 4000 g ，離心 20min ;
6. 吸棄上清，靜置管子 1 ～ 2 分鐘，吸走殘余液體;
7. 加入適量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀;
8. 集中后的病毒懸液分裝成 50 μl每份，保存在成品管中。用碎干冰速凍后儲存在-80 ℃。
慢病毒的濃縮和純化方法二：超速離心沉淀法
1. 取 6 個 Ultra-clear SW28 離心管，用 70% 乙醇消毒后，放在超凈工作臺中打開紫外燈繼續(xù)消毒 30 分鐘。
2. 每 個 Ultra-clear SW28 離心管中加入約 32ml 的預(yù)先處理的病毒上清液。
3. 取一支 10ml 的移液管，吸取 12 ml 20% 的蔗糖溶液。將移液管一直插入到離心管的底部，緩慢將蔗糖溶液打出 4 ml 。同樣地，將剩下 8 ml 的蔗糖溶液分別加入到另兩個離心管中。另取一支干凈的移液管，對剩下 3 管進(jìn)行同樣處理。
4. 用 PBS 調(diào)整各管的重量，使對應(yīng)的離心管之間的重量相差不超過 0.1g 。
5. 按次序?qū)⑺?6 個離心管放入 Beckman SW28 超速離心轉(zhuǎn)頭中。
7. 小心將管子從轉(zhuǎn)頭中取出。倒掉上清，將離心管倒扣在紙巾上放置 10 分鐘使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底應(yīng)當(dāng)有可見的沉淀。
8. 每管中加入 100ml 不含鈣和鎂的 PBS 洗下沉淀。
9. 將 SW28 超速離心管插入到 50ml 錐底離心管中，蓋上蓋子。
10. 在 4 ℃ 溶解 2 小時，每隔 20 分鐘輕輕震蕩。
11.4 ℃ ，500g 離心 1 分鐘，使溶液集中于管底。
12. 用 200 μ l 移液器輕柔吹打使沉淀重懸。避免產(chǎn)生泡沫。將所有管中的液體集中到一個 SW28 離心管中。
13. 集中后的病毒懸液分裝成 50 μ l 每份，保存在成品管中。用碎干冰速凍后儲存在-80 ℃ 。
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